蛋白質(zhì)印跡法是由瑞士*弗雷德里希生物研究所（FriedrichMiescherInstitute）的HarryTowbin在1979年提出的。在尼爾·伯奈特（NealBurnette）于1981年所著的《分析生物化學》（AnalyticalBiochemistry）中被稱為Western Blot。

　　

　　蛋白免疫印跡即Western Blot，是將印跡技術與抗原-抗體反應的特異性相結合的檢測技術，用于分離和檢測生物標本中的某一特定蛋白。其基本原理實混合蛋白質(zhì)樣本通過凝膠電泳分離后，通過特殊虹吸或電場裝置印跡至固相介質(zhì)（NC膜或PVDF膜）上，將針對待測蛋白的特異性抗體作用于濾膜上，利用抗體上偶聯(lián)的酶降解底物在濾膜上生成有色沉淀物或化學發(fā)光產(chǎn)物，從而顯示出待測蛋白的存在及量。

　　

　　在Western Blot中使用內(nèi)參其實就是在WB過程中另外用內(nèi)參對應的抗體檢測內(nèi)參，這樣在檢測目的產(chǎn)物的同時可以檢測內(nèi)參的表達，由于內(nèi)參在各組織和細胞中的表達相對恒定，借助檢測每個樣品內(nèi)參的量就可以用于校正蛋白質(zhì)定量、上樣過程中存在的實驗誤差，保證實驗結果的準確性。此外使用內(nèi)參可以作為空白對照，檢測蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否*、整個Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。

　　

　　操作程序：

　　

　　1．總蛋白制備；

　　

　　2．比色法測定蛋白含量；

　　

　　3．變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE)凝膠電泳，分離蛋白質(zhì)；

　　

　　4．蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印電泳印跡法；

　　

　　5．固相免疫檢測：封閉、一抗雜交、二抗雜交；

　　

　　6．化學發(fā)光法檢測：顯色、曝光、顯影定影；

　　

　　7．結果數(shù)據(jù)分析：膠片掃描，軟件分析；

　　

　　8．提供實驗報告，包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關圖表。